Полужидкий питательный агар рецепт

Полужидкий питательный агар рецепт

https://стройтрансцентр.рф строительный контроль и строительный надзор.

5. Приготовление питательных сред и реактивов

5.1. Общие положения

Предпочтительно использование стандартизованных сухих питательных сред промышленного производства.

При использовании промышленных сухих питательных сред их приготавливают в соответствии с указаниями изготовителя на этикетке.

В этом случае следует соблюдать способ применения и срок хранения питательных сред, указанные на упаковках.

Сухие питательные среды хранят в сухих помещениях, в темноте, при комнатной температуре. Открытые упаковки тщательно закупоривают. Среды с измененным внешним видом (уплотненные, с комками), а также с истекшим сроком годности не используют.

Для приготовления растворов, реактивов и питательных сред применяют воду дистиллированную по ГОСТу 6709-72.

Питательные среды готовят в посуде из инертного материала.

Учитывая возможное изменение рН питательных сред после кипячения и стерилизации, окончательный контроль рН проводят в готовой среде при температуре 25 °С с использованием индикаторной бумаги.

После стерилизации питательные среды оставляют для охлаждения при комнатной температуре. При необходимости розлива в чашки Петри среды охлаждают до температуры (50-60) °С.

Температура сред, хранящихся в холодильнике, перед посевом должна быть доведена до комнатной.

5.2. Питательный бульон

5.2.1. Готовят из сухого препарата промышленного производства по способу, указанному на этикетке.

5.2.2. Питательный бульон (десятикратный) для колифагов готовят путем увеличения в 10 раз навески сухого препарата, указанной на этикетке.

5.3. Питательный агар

5.3.1. Готовят из сухого препарата промышленного производства по способу, указанному на этикетке.

5.3.2. Питательный агар для определения колифагов прямым методом готовят, увеличивая навеску сухого препарата в 2 раза от прописи.

5.3.3. Питательный агар запрещается выдерживать в расплавленном состоянии более 8 ч. Оставшийся неиспользованным агар повторному расплавлению не подлежит.

5.3.4. Полужидкий питательный агар готовят следующим образом: сухой питательный бульон (15 г) и агар микробиологический (3 г) растворить при нагревании в 1000 мл дистиллированной воды. Довести рН до 7,0-7,2, разлить в пробирки и стерилизовать автоклавированием при 121 °С в течение 15 мин.

5.3.5. Питательный агар со стрептомицином готовят из расчета содержания 100 мкг стрептомицина на 1 мл питательного агара, приготовленного по стандартной прописи. Стерильно на стерильной дистиллированной воде готовят раствор стрептомицина в концентрации 10 мг на 1 мл. В готовый питательный агар, отмеренный по объему и остуженный до температуры (45-49) °С, вносят приготовленный стерильный раствор стрептомицина из расчета 0,1 мл на 10 мл питательного агара. Разливают в пробирки для приготовления скошенного агара. Повторное расплавление питательной среды со стрептомицином запрещается.

5.4. Фуксин-сульфитная среда Эндо

5.4.1. Основная модификация

Готовят из сухого препарата по способу, указанному на этикетке. Если на поверхности среды заметны следы влаги, чашки перед посевом необходимо подсушить. Срок хранения чашек со средой не более 2-3 суток в темноте, если производителем не оговорены другие сроки.

5.4.2. Повышение дифференцирующих свойств среды

Для повышения дифференцирующих свойств среды в готовую и охлажденную до (60-70) °С среду перед разливкой в чашки допускается прибавлять на 100 мл среды 0,2 мл 5 %-ного спиртового раствора основного фуксина. Срок хранения раствора фуксина — не более 1 мес.

5.4.3. Модификация среды с добавлением розоловой кислоты

В случаях, когда мембранные фильтры зарастают микрофлорой, не относящейся к бактериям кишечной группы, помимо фуксина, допускается добавление на 100 мл среды Эндо 0,2 мл 5 %-ного спиртового раствора розоловой кислоты. Срок хранения раствора розоловой кислоты -не более 1 мес.

Модификацию среды Эндо с добавлением розоловой кислоты используют только при работе методом мембранной фильтрации.

5.5. Лактозо-пептонная среда

10 г пептона, 5 г натрия хлористого, 5 г лактозы растворяют при нагревании в 1 л дистиллированной воды. После растворения ингредиентов устанавливают рН 7,4-7,6, разливают по 10 мл в пробирки, стерилизуют при (112 ±2) °С 12 мин.

Для приготовления концентрированной лактозо-пептонной среды все ингредиенты, кроме воды, увеличивают в 10 раз, разливают по 1 мл в пробирки и по 10 мл во флаконы.

5.6. Питательные среды для подтверждения способности ферментировать лактозу до кислоты и газа

5.6.1. Полужидкая среда с лактозой из сухого препарата

Готовят по способу, указанному на этикетке.

Срок хранения — не более 2 недель при комнатной температуре.

Посев производят уколом до дна пробирки. При образовании кислоты цвет питательной среды изменяется в соответствии с использованным индикатором. При газообразовании газ скапливается или по уколу, или на поверхности, или в толще среды появляются разрывы. При инкубации посевов более 5 ч газ может улетучиться. В таких случаях на присутствие газа указывают оставшиеся в толще среды “карманы” -потемнения среды на месте бывшего пузырька газа.

5.6.2. Полужидкая среда с лактозой

Готовят при отсутствии сухого препарата.

В 1 л дистиллированной воды растворяют 10 г пептона, 5 г натрия хлористого, (4-5) г агар-агара, доводят до кипения, устанавливают рН 7,2-7,4, добавляют 1 мл 1,6%-ного спиртового раствора бромтимолового синего. Стерилизуют при (120±2)°С 20 мин. В расплавленную среду вносят 5 г лактозы, нагревают до кипения, разливают в стерильные пробирки на; высоту (3-5) см и стерилизуют при (112 ± 2) °С 12 мин. Срок хранения — не более 2 недель при комнатной температуре.

Правильно приготовленная среда зеленого цвета с синеватым оттенком (цвет, бутылочного стекла). При образовании кислоты цвет среды изменяется на желтый.

5.6.3. Лактозо-пептонная среда

Готовят по п. 5.5 с добавлением 1 мл 1,6%-ного спиртового раствора бромтимолового синего на 1 л и разливают по (3-5) мл в пробирки с поплавком.

Готовят по прописи завода-изготовителя.

5.7. Реактивы для оксидазного теста

1 %-ный водный раствор тетраметил-п-фенилендиамина гидрохлорид. Готовят перед употреблением.

Реактив № 1. 1 %-ный спиртовой раствор a -нафтола.

Реактив № 2. 1 %-ный водный раствор фенилендиаминового соединения.

Растворы сохраняют в темных флаконах с притертыми пробками: 1 — до одного месяца, 2 — до одной недели. Перед употреблением к трем частям первого раствора добавляют семь частей второго раствора.

Могут быть использованы коммерческие тест-системы для постановки оксидазного теста (СИБ-оксидаза или аналоги).

Перед работой с каждой серией проб реактивы или тест-системы на оксидазу следует испытывать с тест-культурами микроорганизмов, дающих положительную (Ps. aeruginosa, Ps. fluorescens) и отрицательную оксидазную реакцию (Е. со li).

5.8. Железо-сульфитный агар

В 1000 мл стерильного расплавленного питательного агара (по п. 5.4) добавляют 10 г глюкозы, нагревают до растворения, разливают мерно во флаконы, автоклавируют при (112 ± 2) °С 12 мин (основная среда).

20 %-ный раствор сульфита натрия (Na₂SO₃) и 8 %-ный раствор железа серно-кислого закисного ( FеSO4 ) или железа хлористого (FeCl2) готовят непосредственно перед употреблением в стерильной посуде на стерильной дистиллированной воде. Раствор сульфита натрия нагревают до полного растворения. Перед выполнением анализа в 100 мл расплавленной основной среды вносят 5 мл 20 %-ного раствора сульфита натрия, перемешивают, затем вносят 1 мл 8 %-ного раствора сернокислого железа, перемешивают и стерильно разливают в пробирки высоким столбиком (12-15) см для работы методом мембранной фильтрации или во флаконы для работы методом прямого посева.

5.9. Реактивы для окраски препаратов по Граму

5.9.1. Карболовый раствор генциана фиолетового готовят следующим образом: 1 г генциана фиолетового, 10 мл ректификованного этилового спирта, 5 г фенола растирают в ступке, добавляя 100 мл дистиллированной воды.

5.9.2. Раствор Люголя готовят следующим образом: 1 г йода, 2 г йодистого калия растворяют в 300 мл дистиллированной воды. Хранить во флаконе из темного стекла.

5.9.3. Фуксин Циля готовят следующим образом: 1 г основного фуксина, 10 мл спирта этилового ректификованного, 54 г фенола растирают в ступке, добавляя 100 мл дистиллированной воды.

Источник

Полужидкий агар (по Эдвардсу и Юингу)

Motility Test Medium (Edwards and Ewing) Полужидкий агар (по Эдвардсу и Юингу)

M930

Эту среду используют для определения подвижности энтеробактерий.

Состав**:

Ингредиенты

грамм/литр

Пептический перевар животной ткани

Конечное значение рН (при 25°С) 7,4 ± 0,2

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 22,0 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. Подогреть до кипения для полного растворения частиц. Разлить по 8 мл в пробирки для тестирования. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Остудить пробирки в вертикальном положении.

Принцип и оценка результата:

Эту среду готовят в соответствии с прописью, предложенной Эдвардсом и Юингом (1). В полужидком (0,4-07%) агаре неподвижные микроорганизмы растут по ходу укола, а подвижные дают диффузный рост.

Пробирки засевают уколом, используя бактериологическую иглу из проволоки. О подвижности культуры свидетельствует диффузный рост в среде. Для облегчения учета в среду можно добавить 2,3,5-трифенилтетразолия хлорид (ТТХ)( FD057 ) . Соли тетразолия бесцветны, но в результате редуцирующего влияния бактерий они превращаются в нерастворимый формазан, имеющий красный цвет, что помогает отметить границы роста. Вместе с тем, подвижность Listeria monocytogenes лучше всего определять на среде без ТТХ.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий желтый порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется полужидкая среда, соответствующая по плотности 0,4%-ному агаровому гелю.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Среда имеет желтую окраску, прозрачна, если в пробирках формируется столбик геля.

Кислотность среды:

При 25°С водный раствор (2,2% вес/об) имеет рН 7,4 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 18-24 ч при 35-37°С.

Штаммы микроорганизмов (АТСС)

Рост

Подвижность

Escherichia coli (25922)

Enterobacter aerogenes (13048)

Salmonella enteritidis (13076)

Klebsiella pneumoniae (13883)

Staphylococcus aureus (25923)

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.

Источник

Полужидкий питательный агар рецепт

Для культивирования микроорганизмов используют различные питательные среды. Это необходимо для дифференциации инфекцион­ных болезней, для приготовления вакцин, антибиотиков и др.

К питательным средам предъявляют следующие требования: должны содержать все необходимые вещества для питания микробов, иметь определенную реакцию среды, быть стерильными и обязательно влажными. Питательные среды подразделяют на Простые и сложные.

К простым средам относятся мясопептонный бульон, мясо­пептонный агар, мясопептонный желатин (МПЖ). Все простые питатель­ные среды готовят на мясной воде. Для ее приготовления мясо отде­ляют от жира и фасций, измельчают, заливают водой в соотношении 1:2 и кипятят в течение 30-60 мин. Затем фильтруют, доливают до перво­начального объема и стерилизуют при давлении 0,1 МПа в течение 30 мин.

Приготовление МПБ состоит в следующем. К 1 л мясной воды добавляют 1 % Пептона, 0,5 % Поваренной соли. Устанавливают реак­цию среды (рН 7,2-7,4), кипятят, фильтруют, разливают по колбам и стерилизуют при давлении 0,1 МПа 15-20 мин.

По консистенции питательные среды могут быть Жидкими, полу­жидкими и плотными. Для приготовления полужидких и плотных сред к МПБ добавляют агар (соответственно 0,2-0,3 и 2-3 %). Агар — это вещество, получаемое из морских водорослей. В его состав входят пектиновые вещества. Агар плавится при 90-100 °С и застывает при температуре ниже 45 «С. Как питательное вещество агар микроорга­низмами не используется.

При приготовлении МПА к мясопептонному бульону добавляю 2-3 % Агара, а при приготовлении МПЖ — к мясопептонному бульону добавляют пищевой желатин: 10-12 % — зимой, 18-20 % — летом.

Сложные (специальные) питательные среды готовят для культивирования микробов, которые не растут на обычных, простых средах. Например, яичную среду Петраньяни используют для выращивания туберкулезной палочки. В состав среды входят молоко, картофельная мука, пептон, яичный белок, 2 %-ный водный раствор малахитовой зелени.

К сложным питательным средам относятся дифференциально-диаг­ностические среды (Эндо, Плоскирева и др.), которые служат для отличия одних групп или видов микробов от других. Например, среда Эндо состоит из МПА, лактозы, фуксина основного, обесцвеченного щелочью. На этой среде кишечная палочка растет в виде темно-крас­ных колоний с металлическим блеском, так как сбраживает лактозу с образованием молочной кислоты, которая восстанавливает обесцве­ченный фуксин. Сальмонеллы на среде Эндо растут в виде бесцветных колоний. Они не ферментируют лактозу.

Для выращивания анаэробов готовят среду Китта-Тароцци (МППВ), состоящую из печеночного бульона, кусочков печени на дне пробирки и вазелинового масла, налитого сверху.

Для изучения способности микробов сбраживать сахара в лабора­ториях используют полужидкие углеводные среды, состоящие из пептонной поды, 0,2-0,3 % Агара, моноуглевода и индикатора.

Протеолитнческие свойства микробов (способность расщеплять белки) изучают на желатине, свернутой кровяной сыворотке и молоке.

Среды накопления используют для подавления одних видов микробов и создания благоприятных условий для развития других. Наиболее часто в лабораториях используют накопительные среды (Кауфмана, Мюллера, селенитовую, хлористомагниевую М), которые задерживают рост гнилостных микробов и не препятствуют размноже­нии) сальмонелл.

Для культивирования микробов применяют также синтети­ческие среды, которые включают определенные химические вещества, необходимые для питания микроорганизмов.

Заводы выпускают некоторые питательные среды (МПА, среда Эндо и др.) в высушенном виде, что значительно облегчает метод их приготовления в лабораториях.

Источник