РЕЦЕПТЫ ОСНОВНЫХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД
РЕЦЕПТЫ ОСНОВНЫХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД
Мясная вода Парную говядину или конину освобождают от костей, жира, сухожилий, пропускают через мясорубку. 1 кг полученного мясного фарша заливают 2 л водопроводной воды и кипятят в течении часа, накипь снимают. После кипячения мясную воду остужают для застывания жира, который легко при этом удаляется, фильтруют через ватно-марлевый фильтр до полной прозрачности, затем доливают водопроводной водой до первоначального объема, разливают в бутыли и стерилизуют 20 минут при температуре +120 0 С.
Пептонная вода К 1л дистиллированной воды прибавляют 1- 2г пептона и 0,5г хлорида натрия, устанавливают необходимое значение рН, кипятят 30 минут, проверяют рН, фильтруют через бумажный фильтр до полной прозрачности и стерилизуют при температуре +120 0 С в течение 30 минут.
Мясо-пептонный бульон К 1 л мясной воды добавляют 1г сухого пептона и 5мг хлорида натрия, устанавливают нейтральную рН, кипятят в течении 30 минут, после чего доводят уровень воды до первоначального объема. Затем фильтруют через бумажный фильтр, окончательно устанавливают насыщенным расвором гидрокарбоната натрия или 10% раствором едкого натра требуемую реакцию, стерилизуют 15-20 минут при температуре +120 0 С. Если после стерилизации в мясо-пептонном бульоне выпадает осадок, его фильтруют вторично и снова стерилизуют. Вторичная стерилизация производится при более низкой температуре, чем предшествующая, для предотвращения выпадения осадка.
Мясо-пептонный агар К 1л мясной воды прибавляют 1г пептона и 0,5г хлорида натрия, кипятят на слабом огне при постоянном помешивании до полного растворения добавленных ингредиентов. Приготовленный таким образом бульон фильтруют, устанавливают слабощелочную реакцию (рН 7,2-7,4) и добавляют 0,2-2г измельченного агар-агара (в зависимости от качества агар-агара и назначения среды). После добавления агар-агара жидкость кипятят на слабом огне при постоянном помешивании до полного растворения агара. При помутнении среды ее просветляют. Приготовленный агар фильтруют или декантируют, разливают в пробирки или во флаконы и стерилизуют в автоклаве при температуре +120 0 С в течение 20 минут.
Сахарный бульон (бульон с глюкозой) К 1л мясопептонного бульона нейтральной реакции прибавляют глюкозу в количестве 0,25мг-2г. Перед добавлением к бульону глюкозу растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды. Приготовленную среду стерилизуют текучим паром 3 дня подряд по 30 минут или однократно в автоклаве при температуре +115 0 С 30 минут.
Триптический перевар Хоттингера Говяжье мясо освобождают от костей, жира, сухожилий, нарезают мелкими кусочками, взвешивают и опускают в кипящую воду из расчета 1 кг мяса на 1 л воды. Мясо кипятят в течение 15-20 минут, затем вынимают и пропускают через мясорубку. Бульон смешивают с фаршем и сливают в бутыль с таким расчетом, чтобы 1/3 бутыли оставалась свободной. К горлышку бутыли подбирают хорошо пригнанную резиновую пробирку. Смесь подщелачивают 20% раствором питьевой соды до рН 7,8-8,0, прибавляют очищенную от жира, соединительной ткани и дважды пропущенную через мясорубку поджелудочную железу в количестве 10% к имеющемуся объему (на 1 л жидкости 100 г железы). Вместо панкреатической железы можно прибавить панкреатин в количестве 0,5% и выше в зависимости от его активности. Через 1-2 часа после добавления фермента проверяют реакцию перевара и подщелачивают его повторно до рН 7,4-7,5. Отсутствие сдвига реакции смеси в сторону окисления после прибавления фермента указывает на его недоброкачественность. Содержание бутыли тщательно перемешивают, добавляют хлороформ из расчета 10-30 мл на каждый литр перевара. Бутыль плотно закрывают резиновой пробкой и ставят в термостат при +37 0 С на 7-10 суток. В течении первого дня содержимое бутыли перемешивают вначале каждые 15-20 минут, затем через 2-3 часа, а в последующие дни – по нескольку раз в день, открывая при этом пробку для выхода избытков паров хлороформа. При стоянии в термостате мясо ферментируется, преврящаясь в однородный осадок серовато-желтого цвета, а жидкость из мутно-серой становится совершенно прозрачной, соломенно-желтого цвета. Об окончании переваривания судят по образованию триптофана, обнаруживаемого следующим образом: в пробирку наливают 3-4 мл фильтрованного перевара, добавляют 3-4 капли бромной воды. При наличии триптофана жидкость принимает розово-фиолетовый цвет. Приготовление бромной воды. На 100 мл дистиллированной воды берут 3-3,5 мл чистого брома для получения насыщенного раствора. Хранят в склянке темного стекла.
Кровяной агар Расплавляют 1л 2% мясо-пептонного стерильного агара, охлаждают его до температуры +45 0 С и прибавляют 5-10мл дефибринированной стерильно взятой крови лошади, кролика или барана. Добавление крови производят, соблюдая правила стерильности. Готовую среду разливают в стерильные чашки Петри (предварительно нагретые в термостате), дают ей застыть и подсушивают в термостате. Слой агара должен быть равномерно окрашен в красный цвет.
Бульон на переваре Хоттингера Для приготовления бульона основной перевар Хоттингера разводят в несколько раз дистиллированной или водопроводной водой, добавляя на 1л бульона 0,5мг хлорида натрия, 1мг двузамещенного фосфата калия, устанавливают рН 7,4-7,6 и кипятят 15-20 минут. Приготовленный таким образом бульон фильтруют через ватно-марлевый или бумажный фильтр, разливают во флаконы или пробирки и стерилизуют при температуре +120 0 С в течение 20-30 мин.
Желточно-солевой агар (Чистовича) Для приготовления желточно-солевого агара готовят впрок мясо-пептонный агар (рН 7,2-7,4) с содержанием 10% хлорида натрия. После разливки во флаконы по 100-200 мл агар стерилизуют в автоклаве в течение 20 минут при температуре +120 0 С. Перед употреблением расплавливают, охлаждают до +45-50 0 С и добавляют 20% по объему) стерильной желточной взвеси (1 желток куриного яйца на 150-200 мл стерильного изотонического раствора хлорида натрия). Среду быстро помешивают, разливают в стерильные чашки, которые продолжительное время могут сохраняться в холодильнике.
Молочно-солевой агар К 1л расплавленного мясо-пептонного агара рН 7,2-7,4, содержащего 5-7,5г хлорида натрия, добавляют 10мл стерильного теплого хорошо обезжиренного молока, тщательно перемешивают и разливают в чашки.
Среда Эндо Мясо-пептонный (100 мл) агар рН 7,4 растапливают и охлаждают до температуры +70 0 С, прибавляют 1 г лактозы, предварительно растворенной в стерильной пробирке в небольшом количестве дистиллированной воды и прокипяченной. В отдельных пробирках приготовляют: 2-3 мл спиртового насыщенного основного фуксина; В стерильную пробирку отмеривают 1 мл фуксина и прибавляют раствор сульфида натрия до обесцвечивания фуксина (бледно-розовый цвет). Приготовленную смесь вливают в растопленный агар, хорошо перемешивают и разливают по чашкам. Горячий агар имеет бледно-розовый цвет, а при застывании становится бесцветным. Среду готовят в день ее использования.
Среда Ресселя К 100 мл мясо-пептонного агара (рН 7,2) прибавляют 1г лактозы, 1г глюкозы и 1 мл индикатора Андреде. Среду разливают в пробирки в количестве 5-6 мл, стерилизуют в автоклаве при +112 0 С в течение 20 минут и скашивают так, чтобы на 2-3 см от дна пробирки агар оставался в виде столбика. Ферментацию лактозы определяют по появлению малиновой окраски соответственно добавленному индикатору Андреде в скошенной части среды, сбраживание глюкозы – по окраске столбика. При сбраживании лактозы и глюкозы происходит резкое покраснение всей среды: столбика и скошенной его части. Характер изменения цвета среды Ресселя определяется не одинаковой интенсивностью расщепления микроорганизмами азотистых веществ и образованием щелочных продуктов в аэробных и анаэробных условиях. Газообразование в среде определяют по вспениванию конденсационной жидкости на дне пробирки, а также по образованию трещин и разрывов в агаре.
Цитратный агар Симмонса Растворяют в 1 л дистиллированной воды сульфата магния 2мг, фосфата натрия-аммония 1,5 г, одноосновного фосфата калия 1 г, цитрата натрия кристаллического 3 г, Смесь стерилизуют в автоклаве. Прибавляют 20 г агар-агара, нагревают до его расплавления, устанавливают рН 7,2 и затем прибавляют 1 мл 1,5% спиртового раствора бромтимолового синего.
Среда Сабуро Помещают 18 г агара в 1 л дистиллированной воды и дают ему набухать 30 мин, нагревают, помешивая, пока не растворится агар, добавляют 10 г пептона и 40 г глюкозы или мальтозы. Стерилизация среды проводится в течение 15 мин при +115 0 С.
Среда Китта-Тароцци Печень животного, обычно говяжью, нарезают кусочками по 1,0-1,5 г, прибавляют по весу тройное количество мясо-пептонного бульона или бульона Хоттингера нейтральной реакции, кипятят 30 минут. Бульон отфильтровывают, печень промывают под краном на сите. Отфильтрованный бульон разливают по 7-10 мл в пробирки. В каждую пробирку кладут по 4-5 кусочков отмытой печени. Бульон сверху заливают слоем вазелинового масла и стерилизуют в автоклаве при давлении 0,5 атм 30 минут.
Кровяной агар Цейсслера К 1л 3% мясо-пептонного агара прибавляют 1г глюкозы, устанавливают рН 7,2, разливают во флаконы по 100 мл, стерилизуют при давлении 0,5 атм 30 минут. Перед употреблением к расплавленной и охлажденной до +45 0 С среде прибавляют 20мл свежей дефибринированной крови. Среду разливают в чашки Петри.
Кровяной сахарный агар Агар 2% на бульоне Хоттингера в объеме 100 мл расплавляют и охлаждают до +45 0 С, после чего добавляют к нему 10-15 мл свежевзятой стерильной дефибринированной крови кролика, барана или крупного рогатого скота и 10 мл 20% стерильного раствора глюкозы. Смесь взбалтывают так, чтобы не образовалось пузырей пены, и разливают по чашкам.
Источник
Питательные среды. Желточно-солевой агар Чистович.К МПА (рН 7,2-7,4) добавляют 10% натрия хлорида, к стерильному расплавленному агару с температурой 45- 50° С добавляют 20%
Желточно-солевой агар Чистович.К МПА (рН 7,2-7,4) добавляют 10% натрия хлорида, к стерильному расплавленному агару с температурой 45- 50° С добавляют 20% желточной взвеси (1 желток куриного яйца на 150 мл стерильного изотонического раствора натрия хлорида), компоненты перемешивают, среду разливают в чашки Петри.
Молочно-солевой агар Петрович.К МПА (рН 7,2-7,4), содержащему 5-7,5% натрия хлорида, добавляют 10% стерильного обезжиренного молока, компоненты перемешивают и среду разливают в чашки Петри.
Среда для накопления стафилококкового энтеротоксина.К 1000 мл дистиллированной воды добавляют 20 г пептона, 1 г однозамещенного фосфата калия, 5 г натрия хлорида, 0,1 г кальция хлорида, 0,2 г магния хлорида, 0,8 г агара, устанавливают рН 7,0-7,2, кипятят до расплавления агара, разливают по флаконам, стерилизуют при 116° С в течение 20 минут.
Агар Ваird — Раrkег(желточно-теллурит-глицин-пируватная среда). К 90 мл основной среды с температурой 45° С добавляют 6,3 мл глицинового раствора, 1 мл раствора теллурита натрия, 5 мл эмульсии желтка, компоненты перемешивают, разливают в чашки Петри. Среда пригодна к использованию в течение 28 дней (хранение при 4° С). Перед посевом на поверхность среды наносят 0,5 мл 20%-ного водного раствора пирувата натрия, стерилизованного фильтрацией, распределяют по поверхности, подсушивают. Желточная эмульсия. Свежее куриное яйцо выдерживают в 0,001 N растворе НgС12. Соблюдая правила асептики, отделяют желток и эмульгируют его в 200 мл физиологического раствора. Глициновый раствор. Глицин — 20 г, дистиллированная вода —100 мл. Стерилизуют при 120° С в течение 15 минут. Раствор теллурита натрия. Теллурит натрия — 1 г, дистиллированной воды —100 мл. Стерилизуют фильтрацией
Среда Чепмен.Пептон — 1%, Д-маннит — 1%, натрия хлорида —
7,5% дрожжевой экстракт — 0,25%, двузамещенный фосфорнокислый калий — 0,5%, агар-агар — 1,5%, устанавливают рН 7,0. Среду стерилизуют при 110° С в течение 1,5 часов, добавляют 10% стерилизованного обезжиренного молока.
Фенилэтаноловый агар.Панкреатический гидролизат казеина —
15 г папаиновый гидролизат соевой муки — 5 г, NаС1 — 5 г, фенилэтанол — 2,5 г, агар —15 г, дистиллированная вода —1000 мл, рН 7,3, стерилизуют автоклавированием 15 минут при 118° С.
Источник
Желточно солевой агар рецепт
Рецепт 60. Солевой или сахарный бульон для выделения стафилококков. 6 г хлористого натрия или 1 г глюкозы растворяют в 100 см 3 мясопептонного бульона, устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25 °С 6,9(±0,1). Бульон разливают в колбы или пробирки и стерилизуют при 121(±1) °С в течение 15 мин.
Рецепт 61. Лично-желточная взвесь (желточная эмульсия). Яично-желточная взвесь: свежее куриное яйцо моют водопроводной водой, затем протирают ватой, смоченной в 70% спирте, и обсушивают. Отделяют желток и вносят его в 100 см 3 стерильного изотонического раствора хлористого натрия (физиологического раствора). Тщательно перемешивают при помощи стерильных стеклянных бус.
Желточную эмульсию готовят аналогичным образом, но берут два желтка и смешивают с 10 см 3 физиологического раствора. Приготовленная эмульсия может храниться при температуре 0-5 °С не более 72 ч.
Рецепт 62. Молочно-желточно-солевой агар (МЖСА) с полимиксином для обнаружения стафилококков при исследовании воды. Сухой питательный агар—40-50 г; NaCl—90 г; вода дистиллированная—до 1000 мл. Среду расплавляют при нагревании, устанавливают pH 7,2-7,4, затем разливают в мерные сосуды и стерилизуют при 121(±1) °С в течение 20 мин. Перед употреблением в расплавленный и охлажденный до 50-55 °С солевой агар добавляют (из расчета на 100 мл среды) 10 мл стерильного обезжиренного молока, 10 мл желточной смеси (один яичный желток, тщательно смешанный в асептических условиях с 50 мл изотонического раствора при помощи стеклянных бус), полимиксин М (раствор хранить не более 14 дней) 30000 ЕД. Все компоненты тщательно смешивают.
Готовую среду разливают в стерильные чашки Петри толстым слоем (по 20-25 мл) для выращивания бактерий на мембранных фильтрах и тонким слоем (по 15 мл)—для подтверждающего этапа.
Рецепт 63. Яично-желточно-солевой агар. 1 дм 3 мясопептонного агара перед анализом расплавляют и растворяют в нем 95 г хлористого натрия, охлаждают до температуры 45(±1) °С и добавляют 100 см 3 яично-желточной взвеси. Смесь тщательно перемешивают и разливают в стерильные чашки Петри. Чашки хранят в холодильнике не более 5 суток.
Рецепт 64. Яично-желточно-азидный агар. 10 г пептона, 3 г хлористого натрия, 0,2 г двузамещенного фосфорно-кислого натрия, 15 г агар-агара, 5,5 г мясного экстракта растворяют при нагревании в 1 дм 3 дистиллированной воды. При отсутствии мясного экстракта используют мясную воду. В этом случае все компоненты растворяют в 1 дм 3 мясной воды. Устанавливают pH среды 7,6(±0,1), стерилизуют в автоклаве при 121(±1)°С в течение 30 мин, охлаждают до температуры 50-60 °С, добавляют 0,15 г азида натрия, смешивают, вновь стерилизуют при температуре 121(±1)°С в течение 30 мин, охлаждают до температуры 50 °С, добавляют 150 см 3 яично-желточной взвеси, смешивают и разливают по 15 см 3 в чашки Петри.
Рецепт 65. Молочно-солевой агар. Непосредственно перед посевом к 1 дм 3 расплавленного и охлажденного до температуры 60-70 °С мясопептонного агара, содержащего 65 г хлористого натрия, добавляют 100 см 3 стерильного обезжиренного молока. Устанавливают pH 7,4(±0,1), тщательно перемешивают и разливают в стерильные чашки Петри.
Рецепт 66. Байрд-Паркер агар. Основа среды: в 1 дм 3 дистиллированной воды вносят 10 г триптона или пептона, 17,9 г хлористого лития 6-водного, 5 г мясного экстракта и 5 см 3 (или 1 г) дрожжевого экстракта, 20 г агар-агара.
При отсутствии мясного экстракта вместо дистиллированной воды и мясного экстракта используют 1 дм 3 мясной воды или бульона Хоттингера либо 1 дм 3 мясопептонного бульона. При использовании мясопептонного бульона триптон или пептон в среду не вносят.
Все компоненты, внесенные в 1 дм 3 дистиллированной воды (мясопептонного бульона или бульона Хоттингера), нагревают, помешивая до полного растворения, охлаждают до 50-60 °С. Устанавливают pH 6,8-7,0, разливают в колбы по 90 см 3 и стерилизуют в автоклаве при 121(±1) °С в течение 20 мин. К 90 см 3 расплавленной и охлажденной основы среды добавляют асептически 5 см 3 желточной эмульсии и стерилизованные фильтрованием через мембранный фильтр растворы: 6,3 см 3 раствора глицина концентрации 200 г/дм 3 , 5 см 3 раствора пирувата натрия концентрации 200 г/дм 3 и 1 см 3 раствора теллурита калия концентрации 10 г/дм 3 .
После тщательного перемешивания готовую среду разливают в стерильные чашки Петри. Чашки со средой можно хранить не более 48 ч.
Рецепт 67. Среда с ДНК (для выявления термостабильной нуклеазы). Растворяют в 1 дм 3 дистиллированной воды 6,1 г трисаминометана и доводят pH раствора до 9,0(±0,1).
К раствору добавляют 0,3 г ДНК, 10 г хлористого натрия, 1,1 см 3 раствора хлористого кальция концентрации 1 г/дм 3 , 15 г агар-агара и нагревают смесь до полного расплавления агара. К охлажденной до 65-55 °С среде добавляют 9,2 см 3 водного раствора толуидина синего «С» концентрации 10 г/дм 3 , тщательно перемешивают и разливают по стерильным чашкам Петри. Допускается хранение среды при температуре 6(±2)°С не более 7 суток.
Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 24.10.2019
Источник
